清胰汤对重症急性胰腺炎大鼠白介素－８白介素－１０的影响:急性胰腺炎多久能痊愈

　　摘 要：目的：从实验上探讨清胰汤对重症急性胰腺炎（SAP）白介素-8（IL-8）、白介素-10（IL-10）的影响。方法：将60只大鼠随机分为随机分为正常对照组（假手术组）、模型组（重症急性胰腺炎组）、治疗组（清胰汤组），每组20只，造模后24h测定血淀粉酶、IL-8及IL-10，切取相同部位的胰腺组织观察组织病理学改变。结果：模型组及清胰汤组大鼠血清淀粉酶、IL-8及IL-10的浓度均显著高于对照组，清胰汤组大鼠血清淀粉酶、IL-8的浓度显著低于模型组；清胰汤组胰腺局部炎症反应较模型组减轻，间质水肿减轻，腺泡坏死减少，粒细胞浸润减少。结论：IL-8及IL-10在重症急性胰腺炎的发生发展中起一定作用，清胰汤治疗组IL-8及IL-10水平下降，表明清胰汤可能通过下调重症急性胰腺炎大鼠的IL-8及IL-10途径起治疗作用。�
　　关键词： 重症急性胰腺炎；清胰汤；白介素-8；白介素-10
　　中图分类号：R285.5文献标识码：A
　　文章编号：1673-7717(2008)05-1039-03�
　　Effect of Qingyi Decoction on Changes of IL-8 and IL-10 �in Rat Serum with Severe Acute Pancreatitis
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　　JIN Mu�dan,ZHOU Zhi�lin,FU Zhi�quan�
　　(Gastroenterology Department,The Third People"s Hospital of Hangzhou，Hangzhou 310009,Zhejiang,China
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　　Abstract:Objective:To evaluate the effect of Qingyi decoction on the changes of IL-8 and IL-10 in rat serum with severe acute pancreatitis (SAP). Methods:60 Wistar rats were randomly divided into normal control group (Sham operation group),model group(SAP group) and Therapeutic group (Qingyi decoction group). There were 20 rats in each group.Qingyi decoction was administered orally 30 minutes before model induction，12 hours and 24 hours after model induction. Amy,IL-8 and IL-10 in serum and pancreas tissue were determined and the pathological study was performed as well. Results:The levels of IL-8 and IL-10 in serum SAP and Qingyi decoction group were significantly higher than those in normal control group.The levels of Amy，IL-8 and IL-10 in Qingyi decoction group were significantly lower in SAP group. In Qingyi decoction group pancreas injury was markedly reduced. Conclusion:The results suggest IL-8 and IL-10 play an important role in severe acute pancreatitis.Qingyi decoction probably has protective effects on IL-8 and IL-10 pathways．
　　Keywords:severe acute pancreatitis; Qingyi decoction; interleukin-8;interleukin-10
　　
　　重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是由多因素诱发、多个脏器受累、病情凶险、发展迅速、死亡率高的内科急重症，而多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）或者多器官功能衰竭（multiple organ failure，MOF）是SAP的主要死亡原因。损伤因子（如异常激活的胰酶）导致各种炎症细胞的过度激活，形成亢进的免疫反应，并释放多种炎性介质，启动全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），在机体受到促炎细胞因子损伤引起SIRS的同时，机体的防御系统也随之发生反应，合成并释放抗炎细胞因子，引起代偿性抗炎反应综合征（CARS）[1]。无论失控的SIRS，还是过度的CARS，均表现为机体致炎-抗炎因素的失衡，机体稳态破坏，均可导致炎症损害加重。在SAP时，大量细胞因子产生，促炎因子和抗炎因子共存，其中包括促炎细胞因子IL-8和抗炎细胞因子IL-10[2]。清胰汤是杭州市第三人民医院消化科治疗急性胰腺炎的基本方，本研究通过建立大鼠重症急性胰腺炎模型，观察血清中IL-8及IL-10的变化，探讨重症急性胰腺炎的形成机制并探讨清胰汤对重症急性胰腺炎的作用机制。�
　　
　　1材料和方法�
　　
　　1.1动物及分组
　　60只Wistar大鼠（购自浙江省医学科学院），体重250~300g，按随机数字表法将大鼠分为正常对照组（假手术组）、重症急性胰腺炎组（模型组）、治疗组（清胰汤组），每组20只。各组于术后24h全部处死，留取标本。动物饲养：所有大鼠均给予普通饲料喂养，自由饮水，饲养环境为每笼4只，人工光循环12h/12h，温度为（21±2）℃，温度为（55±2）%。�
　　1.2清胰汤制备
　　清胰汤全方由大黄10g（后下）,芒硝10g，厚朴10g，枳实10g，柴胡10g，芍药10g，山栀子10g，红藤10g组成，由杭州市第三人民医院中药房煎煮浓缩至每1mL药液相当于1g生药备用。�
　　1.3胰腺炎模型的制备
　　大鼠术前禁食不禁水12h，以10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg/kg）。无菌条件下取上腹正中切口入腹，寻找胆胰管十二指肠乳头开口，使用一次性静脉留置套管针于对系膜缘肠壁穿刺，进入肠腔后即将针芯退出，将套管末端接微量泵，以0.1mL/min的速度匀速注入5%牛磺胆酸钠（1mL/kg体重），注毕后拔管，胰腺组织可在短时间内出现充血、水肿，可见包膜下胰腺组织点状或小片状出血，5min后去除小动脉夹，以无损伤缝线缝合肠壁穿刺孔处，关腹。对照组大鼠开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次后关腹。清胰汤治疗组于制模前30min、造模后于12、24h分别给予清胰汤灌胃，正常对照组及模型组给予同剂量蒸馏水灌胃，余处理同模型组。�
　　1.4取材方法
　　大鼠造模后24h以10%水合氯醛腹腔注射麻醉，固定，经心脏取血，测定血清淀粉酶、IL-8及IL-10；同时切取相同部位的胰腺组织观察组织病理学改变。�
　　1.5病理学检查
　　每个标本切片行HE染色，采用盲法由专科医师在光镜下阅片，每张切片随机选择5个高倍视野，观察胰腺组织病理变化。�
　　1.6血清淀粉酶检测方法 分光光度法检测血清淀粉酶。�
　　1.7血清IL-8及IL-10测定（ELISA法）
　　洗涤液用重蒸水1∶20稀释。底物工作液配制：使用前将OPD（Orthophenylenediamine 邻笨二胺）片放入底物稀释中溶解，每片加液SML。标准品液配制：使用前每管中加入蒸馏水200μL溶解。试剂盒设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100μL，每一孔加标准品100μL，混匀后用加样器吸出100μL，移至第二孔，如此反复作对倍稀释至第7孔，最后，从第7孔中吸出100μL弃去，使之体积均为100μL，每8孔为空白对照，建立标准曲线。待测品孔各加入待测样品100μL，将反应板充分混匀后置37℃ 120min。用洗涤液将反应板充分洗涤5次，在滤纸上印干。每孔加第一抗体工作液1滴，将反应板置37℃ 60min。同前洗板，每孔加酶标抗体工作液两滴，将反应板置37℃ 60min。同前洗板。每孔加入底物工作液两滴，置37℃暗处反应10min。每孔加入1滴终止液混匀。在492nm处测吸光值。以标准品1000、500、250、125、62、31、16、0 pg/mL之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线。根据样品OD值在该曲线图上查出相应IL-8及IL-10含量。�
　　1.8统计学处理
　　实验结果以±s表示，用SPSS12.0统计软件进行分析，首先进行方差齐性检验，然后进行t检验，P[3]，在机体受到促炎细胞因子损伤引起SIRS的同时，机体的防御系统也随之发生反应，合成并释放抗炎细胞因子，引起代偿性抗炎反应综合征（CARS）[1]，无论失控的SIRS，还是过度的CARS，均表现为机体致炎-抗炎因素的失衡，机体稳态破坏，均可导致炎症损伤加重。在AP时，大量细胞因子产生，促炎因子和抗炎因子共存，其中包括促炎细胞因子IL-8和抗炎细胞因子IL-10[4]。
　　中医认为重症胰腺炎系由肝胆失疏、湿热蕴结之病机，进一步演变为热毒炽盛、瘀热内阻，或上迫于肺，或内陷心包，或热上血络所致。其病机之关键是“实热血瘀”，所以治法应以“通腑泄热，活血化瘀”。中药清胰汤由大黄、芒硝、厚朴、枳实、柴胡、芍药、山栀子、红藤8味中药组成，由传统名方大承气汤化裁而来，具有理气开郁、清热解毒、活血化瘀、通里攻下的功效。。
　　清胰汤经长期临床验证具有促进肠道蠕动，排除积粪及细菌，减少肠道菌群移位，减轻内毒素血症等作用[5]，吴承堂等[6]研究发现清胰汤直接参与了重症胰腺炎时肠黏膜损伤的修复过程，包括细胞增殖、分化和再生等，对肠黏膜损伤修复有显著促进作用，可保护肠黏膜，对减轻或防止AHNP后因肠黏膜损伤而导致的肠源性内毒素血症具有重要作用 。李东华等[7]认为清胰汤能有效抑制PLA 活性，从而阻止NF-KB的活化，进而减少相关炎性细胞因子的过渡分泌，减轻肺的损伤，降低动物死亡率。
　　促炎-抗炎细胞因子平衡在决定SAP全身表现及临床转归中起重要作用，笔者的实验结果表明IL-8及IL-10在重症急性胰腺炎的发生发展中起一定作用，清胰汤治疗组IL-8及IL-10水平下降，提示清胰汤可能通过下调重症急性胰腺炎大鼠的IL-8及IL-10途径起治疗作用，并促进SAP时促炎-抗炎细胞因子趋于平衡。�
　　
　　参考文献�
　　［1］ Bone RC. Sir Isaac Newton，sepsis，SIRS and CARS［J］. Crit Care Med，1996，24: 1125-1128.�
　　［2］ Wereszczynska-Siemiatkoska U，Dabrowski A，Siemiathowski A，et al. Serum profiles of e-selectin interleukin-10，and interleukin-6 and oxidative stress parameters in patients with acute pancreatitis and nonpancreatic acute abdominal pain［J］. Pancreas，2003，26: 144-152.�
　　［3］Bhatia M，Brady M，Shokuhi S，et al. Inflammatory mediatorin acute pancreatitis［J］. J Pathol，2000，190: 117-125.�
　　［4］Perini F，Morra M，Alecci M，et al. Temporal profile or serum anti-inflammatory and pro-inflammatory interleukinsin acute Ischemic stroke patients［J］. Neurol Sci，2001，22(4): 289-296.［5］巫协宁.奥曲肽和柴芍承气汤、丹参液治疗重症胰腺炎的作用机制［J］.胃肠病学，1999,4(2): 108-109. ［6］吴承堂,黎沾良.中药清胰汤对犬急性坏死性胰腺炎肠黏膜损伤修复的影响［J］．1998，5(6)：326-328．�
　　［7］李东华,刘洪斌,崔乃强，等.清胰汤对大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型肺损伤的治疗机理研究［J］.中国实验方剂学杂志，2006,12(5):43-46.