单核细胞增生李斯特菌【余姚市两农贸市场单核细胞增生性李斯特菌污染监测】
时间：2019-01-15 04:40:53 来源：达达文档网 本文已影响 人 
（浙江省余姚市疾病预防控制中心， 浙江 余姚 315400） 单核细胞增生性李斯特菌是一种人畜共患病病原菌。它能引起人类败血症、脑膜炎以及孕妇流产等疾病。该菌在自然界中广泛存在，食品中肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都可被污染。由于单核细胞增生性李斯特菌能在冷藏食品中长时间增殖、生存，在低温下毒力有增长的可能性以及对热有较高的耐受性等特征, 已成为一种重要的全球性食源性病原菌，WHO 将其列为食源性4大致病菌之一［1］。为了解我市单核细胞增生性李斯特菌在食品中的污染情况，防止食源性单核细胞增生性李斯特菌病的发生和流行，2006―2007年，我们对余姚市两大农贸市场中出售的肉类、海产品样品共365份进行单核细胞增生性李斯特菌的检测，结果报道如下。��
1 材料与方法�
1.1 培养基�
增菌培养基为LB增菌液，由杭州微生物试剂厂提供；分离培养基MMA、三糖铁琼脂等由上海市疾病预防控制中心及杭州微生物试剂厂提供，均在有效期内使用；进口科玛嘉显色培养基由法国Chro Magar公司生产，郑州博赛生物技术研究所提供。�
1.2 试剂�
梅里埃API Listria鉴定试剂条由法国梅里埃公司提供。�
1.3 样本来源�
自2006年2月―2007年1月，按月采取凤山、魏星2家农贸市场生猪肉、生牛、羊肉、禽肉、散装熟肉、海产品5种
样品共365份。其中生猪肉61份，占16.71%；生牛、羊肉61份，占16.71%；生禽肉85份，占23.29%；海产品74份，占20.28%；散装熟肉84份，占23.01%。�
1.4 方法�
1.4.1 培养基制备 各类增菌培养基LB增菌液按配方配置。各类分离培养基MMA、三糖铁琼脂等按配方配置。进口科玛嘉显色培养基按配方配置［2］。半固体培养基按配方配置。�
1.4.2 检测方法 样品25g＋225 mL LB1增菌液→LB1增菌液0.1 mL转种至10 mL LB2增菌液中→分离科玛嘉李斯特菌显色培养基、MMA琼脂培养基→三糖铁斜面初筛、半固体试验→梅里埃API Listria鉴定试剂条鉴定→菌株鉴定。�
1.4.3 动力试验 取18～24 h培养物，接种于半固体培养基，从中央穿刺试管琼脂的3/4，35℃培养24 h观察结果。梅里埃API Listria鉴定试剂条鉴定按说明书操作。��
2 结果�
2.1 检出率�
本次实验中共采集样品365份，共检出单核细胞增生李斯特菌为19株，检出率为5.21%，其中凤山市场检测样品180份，共检出单增李斯特菌7株，检出率为3.89%；魏星市场检测样品185份，共检出单增李斯特菌12株，检出率为6.49 %，经χ2检验差异无统计学意义（P>0.05），见表1。�
表1市售食品单核细胞增生性李斯特菌检出情况 �
在365份样品中生(冻)禽肉类中单核细胞增生性李斯特菌检出率最高，为16.47%，其次为散装熟肉，检出率为4.76%，生猪肉中检出率为1.61%，生牛（羊）肉和海产品均未检出单核细胞增生性李斯特菌。�
2.2 两种培养基培养结果比较�
365份样品分别经过科玛嘉显色培养基和国产培养基分离培养后，共检出单核细胞增生性李斯特菌19株，经科玛嘉显色培养基检出19株，经国产MMA培养基检出1株；
3 讨论�
本次两农贸市场中在生猪肉、生(冻)禽肉、散装熟肉中均检出单增李斯特菌，表明这些食品中均有不同程度的李斯特菌污染，其中以生(冻)禽肉的污染最为严重，污染率高达16.47%。这说明我市区禽畜肉类存在宰前感染和宰后污染的问题。生肉中的单增李斯特菌主要来自环境,其在单增李斯特菌的传播链中可能起着重要的作用。其次为熟肉食品，这可能是由于散装熟肉多由小作坊生产, 对原料和生产过程缺乏卫生质量控制导致带菌率高。国内有报道单增李斯特菌在一般热加工处理中能存活, 热处理杀灭了竞争性细菌群, 使单增李斯特菌在没有竞争的条件下易于存活［３］。所以在食品加工中, 中心温度必须达到70 ℃持续2 min以上, 同时由于市场摊档盛具为开放或半开放状况, 极易造成加工后二次污染。虽然污染率只有4.76%，但提示对即食食品的卫生监管尤为重要。生猪肉中检出率最低，仅为1.61%，与相关报道［４］不相符。�
本次检测的365份样品中共分离得到单核细胞增生性李斯特菌19株，检出率为5.21％，与我省温州CDC报道的5.96％相接近［５］。单核细胞增生性李斯特菌在科玛嘉显色培养基和国产MMA培养基上的检出率经这是由于MMA培养基只适用于李斯特菌的选择性分离培养，不能特异性分离单核细胞增生性李斯特菌［6］，而且使用国标法（GB/T4789.30－2003）检测需要2次增菌及平板分离，在MMA培养基上生长的菌落还需要进一步的生化鉴定才能确定结果，整个过程至少需要4~5 d的时间，工作量大、所需时间长。而科玛嘉显色培养基的原理主要是检测由毒力基因编码的溶血素，而此种溶血素只存在于单核细胞增生性李斯特菌和伊氏李斯特菌中，因而可以很好的将此两种菌与李斯特菌属的其他种分开来，而且通过在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，直接根据菌落颜色和形态就可以区别于其他李斯特菌和非李斯特菌，从而直接对菌种做出鉴定［6］，这就大大缩短了检测时间，提高了检测效率。�
单核细胞增生性李斯特菌在自然中广泛存在。世界卫生组织(WTO) 关于单增李斯特菌引起的食物中毒报告中指出: 4%～8%的水产品、5%～10%的奶及奶制品、30%以上的肉制品、15 %以上的禽肉制品均被感染, 其发病者死亡率可达30%～70%。随着我国工业化程度的提高和人民生活水平的提高, 冷冻食品的广泛普及, 该菌引起疾病的潜在的危险性增大。由于该菌在低温下能长时间的繁殖、产毒, 经巴氏消毒后仍有部分成活, 且具有耐高渗溶液的性质, 故应加强对屠宰过程、食品的加工、储藏、运输、销售等环节的卫生监管力度, 加强宣传, 提高群众在食品储藏和加工方面的卫生知识和对直接入口的冷藏食品的安全意识, 从而减少该菌引起的食源性疾病的爆发疫情,保证人民群众的卫生安全。��
4 参考文献�
［1］陈伟伟, 付萍, 杨毓环, 等. 用PCR 检测六类食品中单核细胞增生李斯特菌［J］.中国人畜共患病杂志, 2000 ,16 (3) : 68�69. �
［2］Samra Z,Heifetz M,Talmor J, et al, Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens［J］.J Clin Microbiol, 1998,36(4)：990－994.�
［3］何冬梅, 赖蔚冬, 倪汉忠, 等. 2003―2004 年广东省食品中单增李斯特菌污染状况的调查［J］. 华南预防医学, 2005, 31( 增刊) :95- 96.�
［4］王红，李群，陈燕梅，等. 2005―2007年自贡市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况的调查［J］. 中国卫生检验杂志，2007，17(12): 2363-2364�
［5］陈慧燕，洪程基，李毅，等.温州市食源性产单核李斯特菌污染调查.中国卫生检验杂志，2006，16(4)：459－460.�
［6］ Restaino L, Frampton EW, Schabert G.Isolation and detection of Listeria monocytogenes using fluormogenic substrates for phosphatidylinositol specific phospholipase C［J］.Food prot, 1999,62(3)：244－248. �
(收稿日期：2008-08-19)
