黄芪中黄酮类成分指纹图谱方法的建立 黄芪农残图谱
时间：2019-01-26 04:50:39 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的：优选黄芪药材中黄酮类成分梯度洗脱方法和其提取方法，为其指纹图谱的研究提供依据。方法：采用反相色谱技术，二极管阵列检测器，C18柱，通过对乙腈-水梯度洗脱的调节，确立梯度条件，在此基础上又对不同提取方法进行考察，确立了提取方法。结果：确定了90%乙腈-10%乙腈梯度洗脱条件及黄芪甲醇索氏5h的提取方法。结论：该方法可操作性强，适用于黄芪中黄酮类成分指纹图谱的研究。
关键词：黄芪；指纹图谱；梯度洗脱；提取方法
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2008）04-0789-02
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astraglus mem branaceus( Fisch) Bge. var. mongholicus (Bge. ) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus mem branaceus ( Fisch. ) Bge的干燥根。具补气固表,利尿托毒,排浓,敛疮生肌的作用[1]。黄芪的化学成分主要有黄酮类、皂苷类和多糖等[2]。黄芪为常用中药材之一，黄酮类成分具有清除氧自由基，抑制脂质过氧化和维持血中一氧化氮浓度，保护缺血再灌注损伤的作用[3]。对其黄酮类成分进行指纹图谱的研究，将很好的体现出黄芪中黄酮类成分的整体表征，能够更全面的控制药材质量。
1仪器与试药
1.1仪器Beckman 高效液相色谱仪（125型高压输液泵，168型二极管阵列检测器），琛航Inertex C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）。
1.2试剂乙腈（色谱纯）；重蒸馏水（自制）；其它试剂均为分析纯。
1.3对照品芒柄花素(购自中国药品生物制品检定所)。
1.4供试品黄芪药材（购自天津市饮片厂）。
2方法
2.1对照品溶液的制备精密称取芒柄花素对照品适量，加甲醇溶解，配成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备精密称取黄芪药材粗粉（过2号筛）2.5g，用甲醇超声提取3次（30mL,30mL,30mL），每次30min，蒸干甲醇，用25mL热水溶解，用水饱和正丁醇液振摇提取4次（每次25mL），合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次（每次25mL），弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解,定溶至5mL,过0.45μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2.3色谱条件采用Inertex C18色谱柱Beckman 高效液相色谱系统；柱温为30℃；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；进样量为20μL；流动相：A： 5%乙腈，B：95%乙腈；梯度条件1为：0～20min,B相0%～22%；20～40min,B相22%～44%；40～60min,B相 44%～72%；60～70min,B相72%～83%；70～80min,B相83%～100%。结果如图1所示。
结果显示各峰分离良好，但中间段基线不平稳。
采用Inertex C18色谱柱Beckman 高效液相色谱系统；柱温为30℃；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；进样量为20μL；流动相：A 10%乙腈，B 90%乙腈；梯度条件2为：0～8min,B相0%～9%；8～25min,B相9%～30%；25～40min,B相 30%～40%；40～50min,B相40%～60%；50～70min,B相60%～70%；70～80min,B相 70%～80%。结果如图2所示。
结果稍有改善，但20多min处仍存在基线不平稳现象。
采用Inertex C18色谱柱Beckman 高效液相色谱系统；柱温为35℃；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；进样量为20μL；流动相：A 10%乙腈，B 90%乙腈；梯度条件3为：0～8min,B相0%～9%；8～25min,B相9%～30%；25～40min,B相 30%～40%；40～50min,B相40%～60%；50～70min,B相60%～70%；70～75min,B相 70%～75%。结果如图3所示。
结果各峰分离度良好，含量适中。确定方法3为其色谱方法。
2．4提取方法的确立分别采用了索氏提取，回流提取，超声提取，详见表1。
经过综合比较芒柄花素含量和各色谱峰峰数，总峰面积，分离度，确定使用甲醇索氏提取黄芪药材。
2．5提取时间及最终方法的确定分别采用甲醇索氏提取3,4,5,6h，详见表2。
3结果
经过综合比较芒柄花素含量，总峰面积，6h为最高，但与5h相差不大，考虑到节约成本，最终确定使用甲醇索氏5h提取黄芪药材。
4讨论
本实验开始时使用水-乙腈洗脱系统，结果基线不稳定，改用90%乙腈-10%乙腈洗脱系统后得到较好的改善。
使用了索氏，回流，超声3种提取方法及不同的提取溶剂，对黄芪中黄酮类成分的提取方法进行了摸索，以芒柄花素含量和各色谱峰峰数，总峰面积，分离度为评价指标，最终确定了使用甲醇索氏5h提取黄芪药材。
采用黄芪中黄酮类成分-芒柄花素为参照峰对色谱图进行了定位。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京：化学工业出版社, 2005：213.
[2]赵杰.中国常见中药材[M].北京：科学出版社,1995：495.
[3]刘晋华，陈静然，尤光甫.黄芪对心肌保护作用的药理学研究进展[J].中成药,2002,24(8):623.
