胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）表达的影响|慢性胰腺炎怎么治
时间：2019-01-26 04:52:31 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的：观察中药胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠肿瘤坏死因子α(TNF－α)表达的影响。方法：以L－精氨酸左下腹腔注射制备大鼠慢性胰腺炎模型，予相应药物灌胃治疗，2个月后取胰腺组织用免疫组织化学法测定TNF－α的含量。结果：模型组TNF－α含量明显高于空白组、中药对照组及中药治疗组，中药治疗组TNF－α含量低于中药对照组。结论：胰泰复方能降低胰腺组织中TNF－α的含量，对慢性胰腺炎胰腺纤维化具有恢复作用。
关键词：慢性胰腺炎；胰腺纤维化；胰泰复方；肿瘤坏死因子α(TNF－α)
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2008)07－1378－02
慢性胰腺炎(chronic pancreatitis，CP)是临床常见的消化系统疾病，其典型的病理表现为胰腺实质纤维化，腺泡细胞萎缩，胰管变形，细胞外基质(extracellular matrix，ECM)生成增多等。胰腺纤维化的早期阶段大多数与炎症反应有关，肿瘤坏死因子α(TNF－α)作为促炎因子，在ECM产生过程中通过相应的信号途径发挥重要作用。本实验旨在观察中药胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠肿瘤坏死因子α(TNF－α)含量的影响，为慢性胰腺炎的诊断和治疗开辟一条新路径。
1 材料与方法
1．1 药剂及仪器
①药剂：胰泰复方(含人参、白术、柴胡、红花、甘草等)购于哈尔滨宝丰药业有限公司；清胰利胆颗粒为长春银诺克药业有限公司生产；L－精氨酸为天津市博迪化工有限公司产品。②仪器：德国电动LSD－2离心机；美国Stat Fax－2100酶标仪。
1．2 动物分组及处理
雄性Wistar健康大白鼠40只，清洁级，体重(250±20)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。随机分为4组(模型组、空白组、中药治疗组、中药对照组)各10只。对模型组、中药治疗组、中药对照组进行实验造模，造模药物为生理盐水配制的13.3％的精氨酸溶液，临用前配制，每次给药时分2次予左下腹腔注射制备慢性胰腺炎模型(按大鼠0.02g/kg计算)，于10天内给药3次，每次间隔3天。空白组予左下腹腔注射相同体积生理盐水溶液，次数、方法同前。自第11日开始各组灌胃给药治疗，中药治疗组给予胰泰复方11.25g/kg，中药对照组给予清胰利胆颗粒冲剂2.7g/kg(均按正常成人与大鼠给药剂量系数折算)，空白组、模型组大鼠予生理盐水4mL灌胃。每日1次，共用药2个月。
1．3 标本采取
实验动物处死后开腹取材，摘取大鼠胰腺组织后立即投入4％多聚甲醛溶液中固定12h后，梯度酒精(A)脱水(80％A～95％A×2～100％A×3)，二甲苯透明，石蜡包埋。切片厚度5um，裱于干净载玻片上置60。恒温箱中烤片12h。使用TNF－α试剂盒，按说明书操作，进行组织化学染色。
1．4 TNF－α表达测定
使用病理图像分析系统对TNF－α免疫组化染色结果进行分析，每组随机选10个视野，用显微镜将组织放大200倍后经显微镜摄像仪摄入，按512×512像素分布将图像摄人并保存在病理图像分析系统内，选用免疫组织化学分析模块对切片进行分析。先将图像进行分割，选择点状分割根据阳性表达标记灰度，分析阳性目标面积占统计场面积的百分比。
1．5 统计学处理
应用SPSS13.0统计软件，计量资料以(x±s)表示，采用LSD－t检验。
2 结果
见表1。模型组大鼠胰腺组织中TNF－α含量显著高于空白组(P＜0.01)，中药治疗组TNF－α含量低于中药对照组(p＜0.01)，提示胰泰复方能降低胰腺组织中TNF－α含量，能明显抑制胰腺纤维化进程，对胰腺纤维化有一定的治疗作用。
3 讨论
慢性胰腺炎是一种慢性、进行性胰腺疾病，主要病理特征为胰腺纤维化。细胞因子TNF具有炎症介导活性，是参与炎症反应的重要介质之一，对其它参与炎症反应的细胞因子起诱导和调节作用。根据其细胞来源和分子结构的不同可分为α和β型。TNF－α是一种具有广谱生理和病理效应的可溶性多肽，分子量为17Kdat，主要由单核巨噬细胞产生，具有多项生物学效应，并参与免疫过程，既是天然免疫和特异性免疫的重要介质，又是联系特异性免疫和炎症反应的重要因子之一。低浓度的TNF－α是防御病原微生物的重要因素，若浓度过高，则可引起一些炎性损害。TNF－α具有增强白细胞与血管内皮黏附的作用，可促进炎性细胞的渗出与趋化，激活炎性细胞，它作为一种具有强烈致炎活性的炎症介质，是胰腺炎发病后较早升高的关键因子。除了参与炎症过程，TNF－α还可以刺激PSC增生，并向成纤维细胞分化，促进多种细胞外基质(ECM)分泌。胰腺纤维化的形成主要由于以胶原为主的ECM合成与沉积增加、降解减少，两者失去动态平衡。在成纤维细胞增生和ECM沉积过程中涉及诸多因素，通常与胰腺损伤及组织炎症有关。其中，活化的炎症细胞及损伤的胰腺实质细胞等均可释放多种细胞因子通过旁分泌刺激胰星状细胞(PSC)，被激活的PSC可以产生多种ECM成分，最终导致胰腺纤维化发生。通过对胰腺组织中TNF－α含量的检测，表明TNF－α含量的高低与胰腺纤维化程度有关，在胰腺纤维化时胰腺组织中TNF－α较正常水平升高，故以肿瘤坏死因子α为靶向治疗CP具有十分重要的价值，从而为诊断和治疗CP提供了新的依据。
目前，慢性胰腺炎动物模型的分类大致有饮食法、药物诱导和手术三大类。鉴于文献，L－精氨酸腹腔注射法建立慢性胰腺炎模型其操作简单、可重复性好、损伤小，病变程度均匀一致，采用此法，探索性的建立了病变典型且稳定性较好的适合实验需要的脾虚型动物模型。传统中医理论认为，该病的病机是本虚标实，本虚主要为脾虚，标实主要为气滞血瘀。胰泰复方以四君子汤合元代复元活血汤加减化裁而成，此方以健脾理气活血为治疗本病的基本法则，故适用于有脾虚气滞血瘀临床表现的脾虚型慢性胰腺炎患者。
综上所述，慢性胰腺炎典型的病理表现为胰实质纤维化，所以对慢性胰腺炎主要从抗炎、降低PSC活化、减少ECM沉积等抗纤维化的角度来治疗。胰泰复方对本病的治疗正是从抗炎、抗纤维化角度进行的，从大鼠胰腺组织中TNF－α的含量可以看出，胰泰复方能够抑制TNF－α的合成，降低PSC活化，减少ECM沉积，减轻组织炎症，逆转成纤维细胞增生和活化，降低纤维化造成的病理损害。本实验对TNF－α含量的测定为诊断慢性胰腺炎提供新的依据，对于判定治疗效果和预后情况具有积极意义。
